蛋白纯化,10mM的巯基乙醇怎么加入??

1,一定是在超声之后,将样品高速离心收集上清液之后再加巯基乙醇。

因为巯基乙醇挥发性很高,超声前加基本超声完就挥发光了。

加入巯基乙醇后需要反应一段时间,确保二硫键被打开。

2,10mM的意思就是10mM/L,巯基乙醇原液应该是14.4M的,10mM就是稀释1440倍,假设你有100ml的样品要加 10mM 巯基乙醇,就是加69ul的巯基乙醇原液就可以了。

PS. HIS结合蛋白不牢原因很多,二硫键造成的聚体是其中的一种,可能还有蛋白本身结构的原因。

可以调整一下缓冲液中的盐浓度和pH值试试。

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